DIVE multifotonikonfokaalimikroskopia
Näytteiden ja kudosmallien kehittyessä entistä kolmiulotteisemmiksi ja paksummiksi, muistuttaen enemmän solujen elinympäristön todellista, luonnollista tilaa tai ollen jopa in vivo, tarvitaan myös laitteisto, jolla voidaan kuvata ja dokumentoida tapahtumia syvällä kudoksessa. Tässä työssä multifotonimikroskopia on korvaamaton apu.
Multifotonikonfokaalimikroskopiassa operoidaan infrapuna-alueella toimivalla laserilla, joka penetroituu syvemmälle kudokseen kuin näkyvän valon aallonpituudet. Näkyvät aallonpituusalueet hajautuvat infrapuna-aluetta enemmän biologisissa kudoksissa ja näin kuvantamissyvyys rajoittuu arviolta n. 100 µm tienoille ”perinteisessä” konfokaali-/valomikroskopiassa. Multifotoni-mikroskopiassa fluoresoivat merkkiaineet eksitoituvat kahden tai useamman infrapuna- aallonpituusalueen fotonin jännittäessä fluoroforin vain fokustasolla. Lisää multifotoni-konfokaalimikroskopian periaatteesta Principles of Multiphoton Microscopy for Deep Tissue Imaging -videosta.
Leica STELLARIS 8 DIVE
Leica STELLARIS 8 DIVE (Deep In Vivo Explorer) tarjoaa upean ja joustavan työkalun kuvantamiseen jopa yli 1 mm syvyyteen. Luonnollisesti maksimaalinen saavutettava syvyys riippuu kudostyypistä, näytteen valmistuksesta (Clearing methods), käytetyistä leimoista ja niin edelleen. Mikroskopiajärjestelmä voidaan rakentaa joko käänteismikroskoopin tai pystymikroskooppirungon ympärille. Käänteismikroskooppi on luonnollisesti joustavin ratkaisu erilaisten näytteiden suhteen, mutta toisaalta pystymikroskoopin ylhäältäpäin tuleva objektiivi tarjoaa mahdollisuudet toisentyyppisiin in vivo -kuvantamisasetelmiin.
Once the microscopist reaches the collagen structure, she knows that her tissue of interest (here stem cells in intestines) is close. Confetti mouse small intestines: From SHG, gray indicates collagen1 and cyan, green, yellow, and red lineage traced stem cells. Sample courtesy of Jacco van Rheenen, Netherlands Cancer Institute, NL.
4TUNE detektorijärjestelmän sekä intuitiivisen ja helppokäyttöisen ohjelmiston myötä käsissä on markkinoiden joustavin ja helppokäyttöisin multifotonikonfokaalimikroskooppi. Leican multifotonikonfokaalissa ei tarvita suotimia, vaan käytössä on täysi spektraalinen vapaus sekä eksitaatio- että emissio -puolilla. 4Tune mahdollistaa myös sen, että pakettiin kuuluu hyvin helppo ja nopea työkalu myös näytteiden leimattomaan kuvantamiseen. Tämän yksinkertaisempaa ei SHG tai THG signaalin nappaaminen voisi enää olla!
Vario Beam Expanderin (VBE) avulla voit säätää vapaasti parhaan resoluution ja syväterävyyden välillä: voit matkata erittäin syvälle näytteeseen tai optimoida kohti parasta erotuskykyä. Käyttäjälle kaikki on yhden liukukytkimen päässä.
Multifotonilaserin pulssitus ja Leican nopeat Power HyD -detektorit mahdollistavat myös tau- ja FLIM -ominaisuuksien hyödyntämisen. Kaikki on integroituna sekä sisäänrakennettuna, ja multifotonikonfokaalimikroskopian uusi ulottuvuus on saavutettavissa vain hiiren klikkauksella.
DIVE -laitteisto on tietenkin varusteltavissa tarvittaessa vaikka WLL:lla (White Light Laser), ja se voi toimia myös aivan ”tavallisena” konfokaalimikroskooppina palvellen siten hyvin moninaisen käyttäjäkunnan tarpeita!
Kuva 1. Mouse brain cortex, Thy1-eYFP. 20% improved penetration depth using Best Depth setting. IRAPO 25×1.0 W motCorr. Sample courtesy of Kevin Keppler, Light Microscope Facility, DZNE Bonn (Germany).
Kuva 2. Kidney section cleared with RapidClear and imaged with multiphoton excitation. The first image is intensity, the second TauContrast (850 nm excitation), and the third from four spectral channels where red indicates blood vessels (AF488, 920 nm excitation), gray collagen (SHG), green nerve cells (SytoxOrange, 1040 nm excitation), and blue nuclei (AF633, 1100 nm excitation). Courtesy of SunJin Labs.
Artikkelikuva. Confetti mouse small intestines: Collagen1 is shown in gray (label free SHG) and lineage traced stem cells are shown in cyan, green, yellow, and red. Stem cells play an important role in the spread of cancer within organisms. Sample courtesy of Jacco van Rheenen, Netherlands Cancer Institute, NL.
